Музей МХАТ был основан 27 октября 1923 года по предложению Константина Сергеевича Станиславского. С самого начала музей располагался в помещении МХАТ в проезде Художественного театра.
Первоначально собрание музея располагалось под сценой и насчитывало всего 275 предметов. Сейчас же коллекция музея превышает 330 000 предметов, среди которых документы, связанные с работой театра, макеты, живопись, графика, костюмы, программы, вещи актеров и театральные реликвии – все то, что составляет многогранную жизнь театра.
Музей имеет постоянную экспозицию, которая расположена на 2-м этаже театра (вход на Малую сцену МХТ имени А.П. Чехова). На экспозиции отображена история МХАТ с момента его основания в 1898 году и до смерти в 1943 году Вл.И. Немировича-Данченко, одного из основателей МХАТ.
Посетители музея имеют уникальную возможность заглянуть в мемориальный кабинет Вл.И. Немировича-Данченко, артистические уборные К.С. Станиславского и О.Н. Ефремова, а также увидеть «Зеленое фойе», где проходят тематические выставки музея. На 4-м этаже расположены дирекция, научные отделы и читальный зал Музея.
В ноябре 2022 года в рамках проекта «Монологи» в экспозиции появились мультимедийные мониторы, на которых артисты мастерской Брусникина рассказывают об основных перипетиях творческой жизни МХТ первых десятилетий его существования: от успеха постановок пьес Антона Чехова до событий вокруг пьесы Михаила Булгакова «Дни Турбиных».